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有了它,使用人胰島素elisa試劑盒會更簡單

發(fā)布時間: 2022-12-23  點擊次數(shù): 1826次
  人胰島素elisa試劑盒采用的是雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)(ELISA)。測定樣品中人胰島素水平。向預(yù)先包被了抗人胰島素抗體的酶標(biāo)孔中,加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本,溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗胰島素抗體。再與HRP標(biāo)記的鏈霉親和素結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入顯色底物TMB,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。最后,在450nm處測定反應(yīng)孔樣品吸光度(OD)值,樣本中的人胰島素濃度與OD值成正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中人胰島素的濃度。
 
  人胰島素elisa試劑盒的使用方法:
  人胰島素elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本水平。用純化抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入抗體,再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品濃度。
 
  1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
  2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
  3、細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
  5、保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
  自備物品:
  1、酶標(biāo)儀(450nm)
  2、高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  3、37℃恒溫箱

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