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有了它,操作白介素elisa試劑盒會更簡單

發(fā)布時間: 2023-01-12  點擊次數(shù): 990次
  白介素elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白介素水平。用純化的人白介素抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素,再與HRP標(biāo)記的白介素抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。
 
  白介素elisa試劑盒的計算:
  以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo), 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
  試劑盒性能:
  1、樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。
  2、批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%。
 
  血清elisa試劑盒的操作流程如下:
  1、血清總補體ELISA試劑盒待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
  2、酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
  3、洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,產(chǎn)品僅用于科研用洗滌液過洗一遍,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
  4、陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
  5、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  6、洗板,同(4)。
  7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
  8、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  9、洗板,同(4)。
  10、每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
  11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
  12、分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
  13、數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準。

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