BL21（DE3）感受態(tài)細胞

簡要描述：BL21（DE3）感受態(tài)細胞
非毒性蛋白的高水平表達，可同時用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達；
電轉(zhuǎn)感受態(tài)效率達1×1010 cfu/μg DNA，可用于各種多肽，蛋白表達文庫的構(gòu)建

更新時間：2022-01-20

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

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詳情介紹

品牌	其他品牌	貨號	BFNC86067
規(guī)格	10x100ul/50x100ul	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	僅用于科研	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

BL21(DE3)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86067-01(10×100ul)/BFNC86067-02(50×100ul)

BL21(DE3)： 100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl

保存條件(保質(zhì)期)： -80℃（6個月）

基因型

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm(DE3)

產(chǎn)品說明

BL21(DE3)菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區(qū)整合于BL21的染色體上，所以稱為BL21(DE3)?？赏瑫r表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。

青旗生物生產(chǎn)的BL21(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達10⁷cfu/μg DNA。

操作方法

1.BL21(DE3)感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

BL21(DE3)感受態(tài)細胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) bydissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。