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elisa實(shí)驗(yàn)步驟:探究生物分子的檢測(cè)與定量分析

發(fā)布時(shí)間: 2023-09-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1299次
  elisa(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)是一種常用于生物分子檢測(cè)與定量分析的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它通過利用酶標(biāo)記的抗體與特定目標(biāo)物相互作用,再通過酶促反應(yīng)產(chǎn)生的顏色變化來定量測(cè)量目標(biāo)物的存在量。下面將介紹elisa實(shí)驗(yàn)的基本步驟。
 
  第一步:涂覆抗原
  將待檢測(cè)的抗原或抗原相關(guān)的分子均勻地涂覆在微孔板的孔底表面上。這個(gè)抗原可以是蛋白質(zhì)、多肽、糖類等生物分子。
 
  第二步:阻斷
  為了防止非特異性的背景信號(hào),需要在涂覆抗原后加入阻斷劑,例如牛血清蛋白(BSA)或牛奶粉,來覆蓋微孔板上未被涂覆的表面。
 

 

  第三步:加入樣品和對(duì)照
  加入待檢測(cè)的樣品或標(biāo)準(zhǔn)溶液到微孔板中,同時(shí)設(shè)立陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。陽性對(duì)照含有已知濃度的目標(biāo)物,而陰性對(duì)照則不含目標(biāo)物。
 
  第四步:孵育
  將微孔板蓋上,置于恒溫箱或孵化器中,在適當(dāng)?shù)臏囟认逻M(jìn)行孵育。孵育的目的是讓待檢測(cè)樣品中的目標(biāo)物與已涂覆在孔底上的抗原相互結(jié)合。
 
  第五步:洗滌
  在孵育結(jié)束后,使用洗滌緩沖液反復(fù)洗滌微孔板,以去除未結(jié)合的樣品和非特異性的成分。
 
  第六步:加入檢測(cè)抗體
  加入酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體,該抗體能與目標(biāo)物形成免疫復(fù)合物。該抗體一般與酶(如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等)標(biāo)記結(jié)合,以便在后續(xù)步驟中通過酶促反應(yīng)來檢測(cè)目標(biāo)物的存在。
 
  第七步:再次洗滌
  用洗滌緩沖液洗滌微孔板,去除未結(jié)合的檢測(cè)抗體。
 
  第八步:加入底物
  加入適當(dāng)?shù)牡孜锶芤?,底物?huì)與酶發(fā)生反應(yīng),并在酶的作用下產(chǎn)生可見的顏色。底物的種類和酶的選擇取決于所使用的檢測(cè)方法和設(shè)備。
 
  第九步:反應(yīng)停止
  通過加入一種停止液或改變反應(yīng)條件,停止底物的反應(yīng)。這將阻止顏色的繼續(xù)發(fā)展,并固定目標(biāo)物的信號(hào)。
 
  第十步:測(cè)量與分析
  使用光譜儀、酶標(biāo)儀等設(shè)備對(duì)微孔板中各孔的顏色強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)量。利用已建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以根據(jù)樣品的顏色強(qiáng)度確定目標(biāo)物的濃度。
 
  elisa實(shí)驗(yàn)是一種常用的生物分子檢測(cè)和定量分析方法,廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、生物學(xué)研究、藥物開發(fā)等領(lǐng)域。通過合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和嚴(yán)格的操作,elisa實(shí)驗(yàn)可以提供可靠、準(zhǔn)確的生物分子定量結(jié)果,為科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)診斷提供有力支持。

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