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關(guān)于elisa實(shí)驗(yàn)步驟,我們已經(jīng)為您整理好了

發(fā)布時(shí)間: 2022-03-22  點(diǎn)擊次數(shù): 1355次
  elisa是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。
 
  在檢測(cè)時(shí),受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體,通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
 
  elisa實(shí)驗(yàn)的原理:
  1、包被:抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面,原因是蛋白質(zhì)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反應(yīng)等免疫活性;
  2、標(biāo)記:抗原或者抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接成酶結(jié)合物而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點(diǎn);
  3、顯色:酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或抗體結(jié)合后,也被固定在固相載體上,加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng),根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計(jì)算抗原或者抗體的相對(duì)含量。
 
  1、從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需酶標(biāo)板孔數(shù)目,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL,空白孔不加。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
  3、加酶:標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔。
  4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
  5、配液:將20X濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍后備用。
  6、洗滌:小心揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次。
  7、顯色:每孔加入底物A、B各50μL,輕輕震蕩混勻后,37℃避光孵育15min。
  8、終止:每孔加入終止液50μL,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立刻轉(zhuǎn)為黃色。
  9、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,15分鐘內(nèi)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度(OD值)。

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